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生長因子ELISA試劑盒的制備工藝流程

更新時(shí)間:2025-03-05點(diǎn)擊次數(shù):325
  生長因子ELISA試劑盒的制備工藝主要包括以下步驟:
  1.抗原或抗體的包被:將需要檢測(cè)的生長因子相關(guān)抗原或抗體通過物理吸附、離子鍵合或共價(jià)結(jié)合等方式,均勻地固定在固相載體(如微孔板)表面。這是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),其質(zhì)量直接影響后續(xù)步驟的效果。
  2.封閉:加入無關(guān)蛋白質(zhì)(如牛血清白蛋白、脫脂奶粉等)或其他封閉劑到固相載體上,以封閉未結(jié)合抗原或抗體的空白位點(diǎn),減少非特異性結(jié)合,降低背景干擾。
  3.標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的準(zhǔn)備:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí),對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚恚缦♂尅㈦x心等,以確保樣本中的待測(cè)物質(zhì)能夠與固相上的抗原或抗體充分反應(yīng)。
  4.一抗的結(jié)合:向包被有抗原或抗體的固相載體中加入待測(cè)樣本,使樣本中的目標(biāo)物與固相上的分子發(fā)生特異性結(jié)合。然后,洗去未結(jié)合的雜質(zhì),以凈化反應(yīng)體系。
  5.二抗的結(jié)合:加入與一抗相對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗,使其與一抗結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。這一步可以進(jìn)一步放大檢測(cè)信號(hào),提高檢測(cè)的靈敏度。
  6.生長因子ELISA試劑盒底物的添加:加入適當(dāng)?shù)牡孜锶芤海缢募谆?lián)苯胺(TMB),經(jīng)辣根過氧化物酶(HRP)催化作用產(chǎn)生顏色變化,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物質(zhì)的定量檢測(cè)。
  7.終止反應(yīng):在底物反應(yīng)達(dá)到適當(dāng)程度后,加入終止液(如硫酸)來停止酶反應(yīng),使顏色反應(yīng)穩(wěn)定下來,便于后續(xù)的測(cè)量和分析。
  8.結(jié)果測(cè)定與分析:使用酶標(biāo)儀等儀器測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)物的顏色強(qiáng)度或吸光度值,并根據(jù)已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中生長因子的濃度或含量。


 




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